目的:制备小鼠角叉菜胶性足肿模型,筛选抗炎药的抗炎作用
关键词:小鼠 角叉菜胶 足肿 炎症 抗炎
原理:角叉菜胶为常规致炎剂,小鼠足跖皮下注射能引起炎症渗出,使致炎侧重量增加,称取2侧足重的差别,即可考察炎症的程度和抗炎药的作用.
主体内容:
一、模型制备 体重18~22 g的昆明种小鼠,♀♂不拘,随机分组,左后肢分别im 受试药、地塞米松 2 mg/kg或生理盐水(或溶媒),于给药后30 min时在每鼠右后足跖sc 1%角叉菜胶30 μl致炎。5 h后处死小鼠,从踝关节处对称剪下鼠足,称重,以左、右足重量差作为鼠足肿胀度。
二、注意事项:
1.注射角叉菜胶后5 h肿胀度约70 mg, 24 h时肿胀度可达100 mg以上。
2.角叉菜胶注射后12 h时给抗炎药,24 h时取足称重,地塞米松 1 mg/kg im未显示出疗效。致炎前给药,地塞米松2 mg/kg 抑制率达40%。
3.剪炎足以髁关节处骨性标志为准,务必左右对称,左右正常足剪下称重左右差应<5%。
4.Sc 角叉菜胶用一次性1 ml注射器,针头为5#。注射时从远心端进针,沿正中线皮下水平进针2 mm。
5.角叉菜胶研成粉细,用盐水混悬,用内切式匀浆器充分打匀。
名称:巴豆油诱发小鼠耳肿标准操作规程
目的: 研究抗炎药的抗炎作用或量效关系。
关键词:巴豆油 小鼠 耳肿 炎症 抗炎
主体内容:
[药品、试剂及配制]
阳性对照药用地塞米松磷酸钠注射液, 用蒸馏水稀释至0.2 mg/ml。或用乙酰水杨酸,取乙酰水杨酸结晶,研细后用蒸馏水混悬为40 mg/ml,用前摇匀。灭菌生理盐水。巴豆油致炎合剂按下方配制:
巴豆油 2%
无水乙醇 20%
蒸馏水 5%
乙醚 73%
受试药可用生理盐水配制。如有赋形剂,对照组应用等体积赋形剂对照。
[器械与仪器]
手术剪。眼科剪。1 ml 注射器。100 μl微量进样品。6.5 mm打孔器,橡胶榔头,硬木板。1/10000电子天平。小鼠灌胃器或51/2号注射针头。平皿5个,中间划线,并标上“左” 、“右” 标记。
[实验动物]
昆明种小鼠,体重22-30 g均可,但每批实验小鼠体重差别不应>3 g,小鼠体重差别愈小愈有可比性。
[方法]
动物分组:昆明种小鼠50只,体重25~28 g,♀、♂各半,随机分为5组:
对照组:用生理盐水0.1 ml/10 g (或赋形剂) im。
地塞米松组:用0.2 mg/ml 0.1 ml/10 g地塞米松溶液 im。
受试物低剂量组:用受试物0.1 ml/10 g im。
受试物中剂量组:用受试物0.1 ml/10 g im。
受试物高剂量组:用受试物0.1 ml/10 g im。
给药及致炎:注射给药30 min后(口服药物后1h)1人固定小鼠,另一人用微量注射器吸取巴豆油致炎合剂,在右侧耳壳正反两面均匀涂以0.1 ml巴豆油致炎合剂(每面50 μl),涂巴豆油后单独隔离20 min, 以防鼠间互相污染,然后每笼5-10只饲养,注意喂水。致炎4 h后颈椎脱臼处死动物,沿耳廓基线剪下双耳,于同一部位用打孔器 (直径6.5 mm)冲下耳片,放在平皿相应标记部位,立即称重。以两耳片重量之差为肿胀度(mg),求出肿胀抑制率(%)。
抑制率(%)=(对照组鼠耳肿胀度-受试组鼠耳肿胀度)/对照组鼠耳肿胀度×100%
注:小鼠左耳被巴豆油污染后重量超过10 mg, 应弃去不用。打耳片时应注意两侧对称,打孔器外缘距耳尖边缘0.5 mm左右。所打耳片不应有缺口、或粘有多余组织。有多余组织时应对准打孔器所留痕迹用眼科剪刀仔细修齐后再行称重。实验室温度应>18 ℃, 过冷则血管收缩,肿胀度变小;湿度应为40-80%,过干则导致组织脱水。本实验对照组小鼠耳肿胀度应>10 mg,并可被地塞米松(2 mg/kg,im)抑制之。