细胞信号转导是指细胞外因子通过与受体(膜受体或核受体)结合,引发 细胞内的一系列生物化学反应以及蛋白间相互作用,直至细胞生理反应所需基因开始表达、各种生物学效应形成的过程。
现已知道,细胞内存在着多种信号转导方式和途径,各种方式和途径间又有多个层次的交叉调控,是一个十分复杂的网络系统。高等生物所处的环境无时无刻不在变化,机体功能上的协调统一要求有一个完善的细胞间相互识别、相互反应和相互作用的机制,这一机制可以称作细胞通讯(Cell Communication)。在这一系统中,细胞或者识别与之相接触的细胞,或者识别周围环境中存在的各种信号(来自于周围或远距离的细胞),并将其转变为细胞内各种分子功能上的变化,从而改变细胞内的某些代谢过程,影响细胞的生长速度,甚至诱导细胞的死亡。这种针对外源性信号所发生的各种分子活性的变化,以及将这种变化依次传递至效应分子,以改变细胞功能的过程称为信号转导(Signal Transduction),其最终目的是使机体在整体上对外界环境的变化发生最为适宜的反应。在物质代谢调节中往往涉及到神经-内分泌系统对代谢途径在整体水平上的调节,其实质就是机体内一部分细胞发出信号,另一部分细胞接收信号并将其转变为细胞功能上的变化的过程。所以,阐明细胞信号转导的机理就意味着认清细胞在整个生命过程中的增殖、分化、代谢及死亡等诸方面的表现和调控方式,进而理解机体生长、发育和代谢的调控机理。
细胞信号转导研究的利器——双荧光素酶报告基因检测
信号转导检测
细胞信号转导的调节(抑制或增强)
目的蛋白对已知蛋白的调控
启动子/增强子检测
病毒/细胞相互作用
转录因子(IFN -NF-KB,IRF3)b
药物诱导作用或效果
各种射线处理对细胞因子的调控研究
传统检测方法——WB
SCI文章必备数据(IF>3,调节功能研究)。
Western blotting 得到结果所需时间太久。
操作过程繁琐,并且需要使用比较昂贵的抗体。
WB结果缺乏统计学依据。
人为影响因素太大。
荧光素酶报告基因的优点
优越的灵敏度,比Westernbloting灵敏度高1000倍以上。
具有可靠的统计学原理,每组实验重复三次。
高信号值,无内源活性。
目前主流检测方法。
检测快,灵敏度高。
我们并不放弃WB检测,在荧光素酶检测后,样品在进行WB检测,使实验更具有说服力。
使用范围广,可检测细胞内任何分子。
荧光素酶报告基因的检测原理
原理:制备含有Luc/Rluc的DNA载体,进行过表达细胞株。
细胞选择:根据实验需要选择细胞株,通常选择转染效率较高的293T,Hela细胞及原代细胞等。
转染:将带有荧光素酶标记的报告基因和目的基因进行过表达 (不同时间点) .
提供刺激:一般为药物处理,病毒感染,紫外照射等各种条件刺激。
蛋白收集:采用进口/国产试剂盒(Promega,invitrigen,尚柏生物)进行收集,实验重复三次。
测量荧光:Modulus™ 单管型多功能荧光计 进行检测。
结果分析
服务内容:
1.我们提供IFN-Luc,IFN-Luc,ISRE-Luc,PRDII-Luc,ERSE-Luc,UPRE-Luc,NF-KB-Luc双荧光素标记的报告基因,可对IFN-α, IFN- β, IRF3, NF-KB等通路检测。
2.我们提供常见表达细胞:293T,Hela及常见的原代细胞等。
3.客户只需根据实验需要提供目的基因、荧光素标记的报告基因、表达细胞即可。4.我们提供真实的原始数据,结果分析报告。