支气管上皮细胞的原代培养
2012-05-042703
实验用品:1肺癌手术切取的气管,远离肿瘤组织的正常气管(最好是在取 材后的12小时内操作)
2培养液:BEGM ( clonetics),PBS, 双抗液, 无血清的MEM。
3器具:24孔板培养板,90mm玻璃培养皿(已灭菌),200ul枪及枪头(已灭菌),1ml枪及枪头(已灭菌).
4手术器械:眼科剪, 眼科镊,手术刀。
实验方法:[原代培养——贴块法]
1无菌取出经手术切取的气管,放入90mm玻璃培养皿中,吸取5-6ml的PBS(加过双抗)加入培养皿中,清洗血污,剪除气管外的结缔组织、线头、筋膜。反复用PBS清洗3-4次,纵行切开气管,清洗气管内的黏液,注意:清洗过程中不要损伤上皮细胞。反复清洗气管,尽量清洗干净,否则过多的筋膜和红细胞不利于支气管上皮细胞的生长。
2为防止操作时间过长,使上皮细胞干燥死亡,可往气管组织上加少许无血清的MEM,使其滋润。将清洗干净的气管组织移入干净的90mm玻璃培养皿中,用手术刀将其切成1-2mm乘1-2mm大小的组织块(注意:刀片要锋利),但要注意使上皮细胞面朝下,贴到24孔培养板中,一般每孔贴一块组织块。在组织块周围加少许BEGM ( clonetics),放置37度二氧化碳培养箱培养3-4小时,使其充分贴壁,在培养液完全干涸前补加培养基BEGM 200ul每孔,重新放回37度二氧化碳培养箱继续培养。大概4-5天组织块周围会爬出细胞。有细胞长出后要2-3天换液一次.