一、RNAi技术原理 
　　RNA干扰（RNA interference，RNAi）现象是指内源性或外源性双链RNA (dsRNA) 介导细胞内mRNA发生特异性降解，导致靶基因的表达沉默，产生相应的功能表型缺失。这一现象属于转录后的基因沉默机制 (Posttranscriptional gene silencing，PTGS)。短片段的双链RNA在体内能在酶（Dicer）及相关复合物（RISC）的作用下，变成单链分子，并与目标基因mRNA互补，在Dicer酶作用下，使mRNA发生剪切，转录受抑制或翻译受到抑制，从而在转录水平或转录后水平干扰基因表达。

　　研究表明，RNAi可能的作用途径大致可分为两种：一种是以线虫、真菌和植物为代表的RdRp（RNA-dependent RNA polymerase）途径。RNAi现象有一个靶RNA的大量产生过程，产生的靶RNA在Dicer的进一步作用下， 产生大量的siRNA，达到有效浓度的siRNA能够启动RNAi机制，降解靶mRNA；另一种途径以果蝇和哺乳动物细胞为代表，外源或内源的双链RNA在Dicer的切割下生成siRNA，这些siRNA与其他蛋白质形成RISC(RNA-induced silencing complex）结构，能够识别切割靶mRNA分子。RNAi现象除了使生物体拥有抗病毒、稳定转座子和参与胚胎发育的生物学功能外，还可作为未知功能基因的逆向遗传学的研究手段。目前，RNAi已成为哺乳动物基因功能研究的重要方法。

二、RNAi实验流程
● 设计siRNA
● 合成siRNA
● 将siRNA导入细胞
● 监测RNAi效果

反义寡核苷酸技术
　　DNA上携带有编码蛋白质的氨基酸信息的核酸序列的链，称为正义链(senses trand)；另一条链的核苷酸序列与正义链互补，称为反义链(antisensestrand)。所谓反义寡核苷酸(antisense oligo-deoxyribonucleotide，AS-ODN)又称“反义核酸”，即为人工合成长度为10-30个碱基的DNA分子及其类似物，通过Watson-Crick碱基配对，与靶基因mRNA(正义链)上的特定序列杂交，从而抑制蛋白质的表达。

　　 反义寡核苷酸包括反义DNA、反义RNA和酶性RNA。作用原理是：①AS-ODNs与DNA结合，抑制DNA复制和转录；②AS-ODNs与mRNA前体结合，阻断RNA加工、成熟，影响核糖体沿mRNA移动；③激活RNase剪切杂交链中未配对的碱基。

反义寡核苷酸技术具有明显的优点：
（1）反义核酸是针对特定的靶mRNA（DNA）的序列，基因序列已知；
（2）反义核酸仅有15-30个碱基，结构简单，容易设计和体外大量合成。
（3）反义核酸进入细胞内与细胞周期无关，既可进入增殖期细胞又可进入非增殖期细胞。

反义寡核苷酸技术主要应用于基因的功能研究，以及临床的基因治疗。

三、样本准备
源基因样本

四、BG为您提供以下服务
● 设计并合成干扰siRNA序列，设计并合成正义及反义寡核苷酸序列；
● 获得siRNA核酸或构建siRNA表达载体；
● 根据您的要求进一步转染哺乳动物细胞；
● 检测抑制效果:荧光定量PCR检测mRNA表达情况、Western Blot、IHC检测蛋白表达情况。
 ● 提供实验报告：siRNA序列、反义寡核苷酸序列、构建载体的测序报告；荧光定量PCR检测报告、Western Blot及IHC图片等。

◆ 特别说明
　　 我们尽量优化选择靶位点，由于并不是每个siRNA都能有效抑制目的基因表达，一般建议您设计三个或三个以上序列。
　　本试验收费情况请电话垂询。