反转录PCR（Reverse transcriptase PCR,RT-PCR）是一种从RNA扩增cDNA拷贝的方法。RT-PCR对于获得与克隆mRNA的5’、3’末端序列和从非常少量的mRNA样品构建大容量的cDNA文库方面都是极为灵敏与通用的方法。此外，RT-PCR还易于鉴定已转录序列是否发生突变及呈现多态性，还可用于测定基因表达的强度。我公司采用二步RT-PCR法，可满足客户不同的实验要求。

二、操作流程
● 模板制备：见RNA提取技术服务。
● 引物设计
客户提供上、下游引物，或者我公司提供免费的引物设计及合成（包括RT-PCR半定量检测中的内参引物）。
● 反转录
（1）Microtube管中配制下列模板RNA/引物混合液，全量<15 μl。
试剂名称  使用量
 模板RNA   2μg 
Oligo(dT)12-18 Primer（50μM）  2.5μl 
（2）70℃保温5分钟后迅速在冰上急冷2分钟以上。
（3）离心数秒钟使模板RNA/引物的变性溶液聚集于Microtube管底部。
（4）在上述Microtube管中配制下列反转录反应液。

 试剂名称  使用量
上述模板RNA/引物变性溶液   
5×M-MLV Buffer   5μl 
dNTP Mixture（各10 mM）  1.25μl 
RNase Inhibitor（40 U/μl ）  25U 
M-MLV（200 U/μl ）  200U  
RNase free dH2O   up to 25μl 
42℃保温1小时。
（5）70℃保温15分钟后冰上冷却，得到cDNA溶液。
若需要表达，参考基因表达服务。若需要进行RT-PCR半定量分析，接着以下的操作。
● RT-PCR半定量分析
PCR扩增目的基因及看家基因，产物经过琼脂糖凝胶电泳后进行灰度扫描分析。

 三、样本准备
提供的样品要新鲜并尽可能多，不推荐提供RNA样品，或者提供cDNA，并尽可能详细的提供背景资料（基因序列、Genebank accession number扩增产物的用途等）。

四、价格.实验周期
样本数  收费标准  实验周期
8个以下（含8个）  120元/样品  8个工作日
50个以下（含50个）  100元/样品  15个工作日
50个以上  询价  20个工作日

RNA模板的制备需另收费（见RNA提取服务）以上为1个目的基因的报价。进行相对定量分析时，同一材料的多个目的基因的价格=1个目的基因价格×目的基因个数。

提供结果
完整的实验操作步骤、电泳图、定量分析结果等。