克隆构建是分子生物学研究中最常用到的手段之一。但由于影响因素较多,对研究者经验要求较高,因而往往费时费力。我公司凭借长期分子生物学工作的丰富经验,集中人力,为您提供更高效、更快捷的服务,包括克隆构建及其上下游相关服务的完整解决方案,并将依据目的基因的来源,灵活选择不同的克隆方法,包括从基因组中分离目的基因,由特定mRNA逆转录合成cDNA后再进行克隆和PCR体外扩增目的片段进行克隆等。
1、载体构建
可根据已有载体进行改造方案的设计,完成现有载体不同功能元件的改造;可应客户要求将指定片段亚克隆至各载体。
(1)您需要提供载体改造的具体要求、预进行改造的质粒(序列经测序验证正确)及其图谱和序列、能够获得所需元件或基因的模板(质粒或其它)及其相关图谱和序列。
(2)我们提供构建好的质粒、菌种,测序验证报告。
2、ORF克隆
从动物组织或细胞中提取mRNA,通过RT-PCR扩增获得所需目的基因,并克隆到T载体或由客户指定的载体当中。
(1) 您需要提供目的基因序列,能够获得目的基因序列的材料或上述材料的总RNA:1) 实验材料必须保证新鲜,请您采样后立即放入液氮中速冻或加入样品稳定剂;2)总RNA无明显降解,总量大于5 mg。如果基因丰度较低或调取的基因较长,请您提供尽量多的材料。
(2) 我们提供含有目的基因的质粒及菌种。由于材料的个体差异等原因,我们不保证获取的基因与参考序列的碱基完全一致。
3、PCR产物克隆
直接将客户提供的PCR产物(3’端加A)克隆至T载体中。
(1) 您需要提供体积大于40ul,总量不少于1ug的PCR产物及克隆片段大小。
(2) 我们提供含有目的片段的质粒和菌种及测序验证报告。
4、定点突变
体外定点突变技术是研究蛋白质结构和功能之间的复杂关系的有力工具,也是我们在实验室中改造、优化基因的常用的手段。我公司依靠丰富的分子生物学的实验经验,可帮您完成不同载体不同难度的定点突变,根据突变需要,向目的基因片段中引入任何可能的DNA变异,包括一段碱基的添加、删除、替换等。使您能够顺利完成下一步的试验计划,并节省您宝贵的时间。
(1) 您需要提供原始质粒、质粒图谱(包括大小信息)和序列、突变位点要求。
(2)我们提供突变成功的质粒和菌株及测序报告。