ELISA背景介绍
酶联免疫吸附实验（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay, ELISA）是一种基于抗体-抗原-抗体特异性结合形成三明治复合物的高灵敏度、高特异性的免疫检测技术。鉴于其发展历史较久，技术积累成熟，且操作简便、成本较低、可高通量检测，广泛应用于医学（医疗器械和精密仪器）、生物学、药学、农业、食品安全等领域。根据使用应用的需要，可以分为直接法，间接法，夹心法和竞争法等。
根据ELISA的特点，其常见应用有：病毒/细菌/寄生虫的定性检测，蛋白抗原定量，抗体效价和信号通路的定性和定量研究；药物研发与质量控制相关的血液和组织液中的药物定量，生物制品的效价测定等。
ELISA的显著特点有：通过标准曲线，精确定量抗原分子浓度；定性筛查样本中目标抗原的存在与否；高通量检测大量样本；检测限度达到ng/mL，pg/mL的高灵敏度分析；以及抗原抗体特异性反应的亲和能力。
其中，标准曲线是定量的最终依据，其主要体现的方面有：1.标曲是定量分析的核心依据，通过已知浓度标准品和对应的检测出信号，拟合成数学模型，来反算样本浓度；2.通过最低检测限和最低定量限，线性范围和重复性，来验证实验的可靠；3.根据斜率和截距判断独立实验的正常与否；数据可比性和标准化，来校正数据和减少批间差异。
在ELISA检测中，Sum of Squares Error (SSE，误差平方和) 是数据分析的重要统计量，主要用于评估标准曲线拟合的准确性以及实验数据的离散程度。表示实际观测值（实验数据点）与拟合曲线（如标准曲线）预测值之间的偏差平方和。可以评估标准曲线的拟合优度，SSE越小，说明实际数据点与拟合曲线的偏差越小，曲线拟合效果越好，反之，提示此次实验模型不恰当；另外，在同一批次ELISA板中，不同标准曲线的SSE应接近，并结合R²等统计项目，来判断实验条件的重复性、可靠性和稳定性。见图1，图2。
ELISA Blank作用
Blank孔不仅直接影响SSE的计算（校正OD=实测OD-Blank OD，Blank孔OD值不稳定或异常，会导致校正后的数据偏差增大，从而增加SSE，降低拟合精度。）；Blank孔的较大差异，会体现实验的系统误差；高Blank信号导致低浓度标准点的计量为负数，扭曲标准曲线，增大SSE。
另外，在《酶联免疫吸附法检测试剂注册技术审查指导原则》，《定量检测试剂分析性能评估指导原则》，EP17-A2和《Immunoassay Devices Guidance for Industry》中，均提到定量检测中的Blank孔，明确要求ELISA实验需设置空白孔，并规定其信号应显著低于最低校准品信号（通常要求Blank OD≤最低校准品OD的50%）；或者要求空白孔用于确定检测限（LOD），其OD值需满足：均值+2SD≤低浓度校准品OD值；TMB显色时450nm波长下OD值一般≤0.1；强调空白孔的重复性（CV值应≤20%）等。
实际应用
因为免疫实验的所有形式测量，都需要标准化。所以对Blank孔的控制是ELISA水平重要的具体体现之一。
赛唐生物历时10年，在开发E.coli/CHO/293/SC Yeast/HS Yeast/PP Yeast HCP ELISA过程中，长期坚持打磨基础技术，对Blank本底进行了显著的控制，下降比例达10倍。并统计上百次实验数据，发现Blank从0.1，降低到0.05水平，再到0.01水平(见图3-图9)。
与Cygnus相比，本底降低2-10倍，见表1，图10。为后续药物ELISA定量检测，提供了扎实的体系支持。
| 2023 | 2024 | 2025 | |
| E.coli | 0.104 | 0.021 | 0.011 |
| CHO | 0.09 | 0.034 | 0.021 |
| 293 | 0.072 | 0.053 | 0.014 |
| SC | 0.011 | ||
| PP | 0.089 | 0.111 | 0.009 |
| HS | 0.004 | ||
| Cygnus-E.coli | 0.07 | ||
| Cygnus-CHO | 0.07 | 0.05 |
表1
参考标准
《酶联免疫吸附法检测试剂注册技术审查指导原则》
《定量检测试剂分析性能评估指导原则》
《EP17-A2: Evaluation of Detection Capability for Clinical Laboratory Measurement Procedures; Approved Guideline—Second Edition》
《Immunoassay Devices Guidance for Industry》
上海赛唐生物技术有限公司，专注于生物医药工业检测领域15年研发，推出HCP残留检测系列产品，以及HCP专属性抗体制备、覆盖度分析等全流程技术服务！
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产品类型
| 宿主细胞蛋白残留检测试剂盒 (HCP检测试剂盒) | ||
| CH-K0018-2 | 中华仓鼠卵巢细胞（ CHO）宿主蛋白（HCP）,G2残留检测试剂盒 | |
| CH-K0018-3 | 中华仓鼠卵巢细胞（ CHO）宿主蛋白（HCP）,G3残留检测试剂盒 | |
| HH-H0019-2 | 293细胞宿主蛋白（HCP）,G2残留检测试剂盒 | |
| EH-E0020-3 | 大肠杆菌（E.coli）宿主蛋白（ HCP）,G3残留检测试剂盒 | |
| EH-E0022-3 | 大肠杆菌（E.coli）宿主蛋白（HCP）6S ,G3残留检测试剂盒 | |
| PH-E0021-3 | 毕赤酵母（Pichia Pastoris）宿主蛋白（HCP）,G3残留检测试剂盒 | |
| CG-H0100 | HCP ELISA稀释液 | |
| HP-H0023-3 | 汉逊酵母（Hansenula polymorpha）宿主蛋白（HCP）,G3残留检测试剂盒 | |
| SC-H0024-3 | 酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae ）宿主蛋白（HCP）,G3残留检测试剂盒 | |
| SF-H0025-3 | 昆虫卵巢细胞（Spodoptera frugiperda 9 ）宿主蛋白（HCP）,G3残留检测试剂盒 | 未上线 |
| 单一指标残留检测试剂盒 | ||
| NEGES0890 | 金黄色葡萄球菌蛋白A（Protein A）酶联免疫吸附检测试剂盒（煮沸法） | |
| NEGEP0890 | 金黄色葡萄球菌蛋白A（Protein A）酶联免疫吸附检测试剂盒（变性法） | |
| NEGEP1270 | 消化链球菌蛋白L（Protein L）酶联免疫吸附检测试剂盒 | 未上线 |
| CG-P0200 | Protein L ELISA稀释液 | 未上线 |
| NEGEP1271 | 消化链球菌蛋白G（Protein G）酶联免疫吸附检测试剂盒 | 未上线 |
| NE01I0431 | 人免疫球蛋白G（ IgG）酶联免疫吸附检测试剂盒 | |
| NE03I0431 | 小鼠免疫球蛋白G（ IgG）酶联免疫吸附检测试剂盒 | |
| NE11I0431 | 牛免疫球蛋白G（ IgG）酶联免疫吸附检测试剂盒 | |
| NE06I0431 | 山羊免疫球蛋白G（ IgG）酶联免疫吸附检测试剂盒 | |
| NEGES0015 | 人血清白蛋白（HSA）酶联免疫吸附检测试剂盒 | |
| NEGES0014 | 牛血清白蛋白（BSA）酶联免疫吸附检测试剂盒 | 未上线 |
| NEGED0018 | 葡聚糖硫酸盐（Dextran Sulfate Salt）检测试剂盒(分光光度法) | |
| NEGEK0006 | 卡那霉素（KA）酶联免疫吸附检测试剂盒 | 未上线 |
| 宿主细胞DNA残留检测试剂盒 (HCD检测试剂盒) | ||
| NS-D050T | NS0 宿主细胞 DNA 残留检测试剂盒 | |
| EC-D050T | 大肠杆菌 宿主细胞 DNA 残留检测试剂盒 | |
| VE-D050T | Vero宿主细胞DNA残留检测试剂盒 | |
| HK-D050T | HEK293 宿主细胞 DNA 残留检测试剂盒 | |
| CH-D050T | CHO 宿主细胞 DNA 残留检测试剂盒 | |
| PP-D050T | 毕赤酵母 宿主细胞 DNA 残留检测试剂盒 | |
| CG-D050T | 残留DNA样品前处理试剂盒 | |
| 宿主细胞蛋白残留检测抗体 (HCP检测抗体) | ||
| CH-K0018-3-Ab | 中华仓鼠卵巢细胞（CHO）宿主蛋白（HCP）G3抗体 | |
| CH-K0018-2-Ab | 中华仓鼠卵巢细胞（CHO）宿主蛋白（HCP）G2抗体 | |
| EH-E0020-3-Ab | 大肠杆菌（E.coli）宿主蛋白（HCP）G3抗体 | |
| PH-E0021-2-Ab | 毕赤酵母（Pichia pastoris）宿主蛋白（HCP）G2抗体 | |
| PH-E0021-3-Ab | 毕赤酵母（Pichia pastoris）宿主蛋白（HCP）G3抗体 | |
| HH-H0019-2-Ab | 293细胞宿主蛋白（HCP）G2抗体 | |
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