背景：

新型抗体应用：

       近些年，新型的Fab（抗原结合片段，抗体可变区端）、scFv（单链抗体）和纳米抗体（如VHH）作为抗体工程的重要衍生物，在治疗和诊断领域展现出卓越的应用优势。相比传统IgG抗体，它们凭借小分子量、组织强穿透性、低免疫原性、多价构建灵活性和靶向隐蔽表位等特点，在肿瘤靶向、免疫治疗、分子影像等领域取得了突破性进展。

       在肿瘤治疗方面，如CAR-T/NK细胞疗法、双/多特异性抗体治疗和免疫检查点阻断治疗方面，scFv和纳米抗体（如VHH）因其小尺寸（15-30 kDa，约3.5 nm × 2.5 nm）可减少CAR分子的聚集和强直性信号（tonic signaling），提高T细胞持久性；或者来灵活构建双特异性T细胞衔接器（BiTE），如抗CD3/CD38 scFv融合抗体，表现出AML的强效抗肿瘤活性。另外，在诊断应用方面，Fab/scFv可减少非特异性结合，结合隐蔽靶点表位，减少完整抗体Fc的非特异性结合，提高信噪比和检测出灵敏度。或者在分子影像与液体活检方面，scFv结合电荷纳米酶探针，实现靶点特异性和高灵敏度精准成像。

       虽然Fab/scFv小分子抗体带来了治疗技术，但是也增加了纯化难度。传统的Protein A/G填料也已无法满足纯化需要，其优劣，见表1。来自于Peptostreptococcus magnus的Protein L填料应运而生。

产品简介：

       Protein L是厌氧菌株Peptostreptococcus magnus细胞壁的蛋白分子,是一种分泌型的酸性分子，分子量是95kDa（SDS-PAGE，Reducing agent 2-mercaptoethanol），PI为4.0。能够与免疫球蛋白轻链（Light chain）特异性亲和。是菌株的可溶性培养基上清孵育后，与人IgG琼脂糖珠共同结合纯化被发现，被命名为Protein L。Protein L序列含有5个部分：18个aa（Amino acids）的信号肽；79个aa的氨基端（A）；72-76个aa的β折叠序列，共5个β折叠区（B）；羧基端两个C重复序列，每个重复含52aa；羧基端后的富含脯氨酸亲水的跨细胞壁区域（W）；疏水的膜锚定区（M）。而与Ig轻链作用的是β折叠的B区。

       Protein A/G与IgG的Fc端亲和，与之不同的是，Protein L与人Ig（VκI, VκIII, VκIV亚型）和小鼠Ig（VκII）的κ链高度亲和，且不与重链作用，是否与λ轻链亲和存疑，可以结合多种广谱抗体类型，包括IgG，IgM，IgA，IgD，IgE。所以Protein L被创新型的应用于新型抗体及其片段，如ScFv（Single chain Fragment variable），单域抗体，Fab，CAR（Chimeric Antigen Receptor）流式的表达检测等。

       纯化介质的Protein L与κ轻链抗体共同洗脱下来，不仅干扰目标抗体产物的免疫实验，也阻碍X射线结晶、冷冻电镜实验的抗体构象解析。其次，残留的Protein L可与细胞表面BCR（B Cell Receptor）结合，激活或抑制下游信号通路。最后，其自身免疫原性，以及与抗体药物形成的大分子复合物，增加体内ADA（Anti Drug Antibody）形成可能。Protein L的去除方式一般是利用电荷差异（离子交换层析，IEX）去除；或基于分子尺寸排阻色谱（SEC），分离Protein L与目标抗体。其定量方法是质谱分析（高灵敏度，低通量），ELISA定量（高通量）。所以，我们开发了两步夹心法Protein L ELISA试剂盒，及其专用Buffer，用于含κ-VL抗体药物的Protein L残留定量，且有优异的抗干扰性能。

表1

应用：

       样本：含有κ轻链的IgG产物，经过Protein L纯化柱吸附，低pH洗脱后，buffer中和，作为样本。分别稀释10×，100×，1000×和10000×。配套使用试剂盒专用buffer（CG-P0200），得到稳定的回收率和检测结果，见表2。

Note：本试剂盒目前适用于κ轻链的IgG产物，如有特殊结构抗体，请联系我们针对优化。

表2

参考标准与文献：

ICHQ6B:Specifications:Test Procedures and Acceptance Criteria for Biotechnological/Biological Products.

ICH Q7: Good Manufacturing Practice Guide for Active Pharmaceutical Ingredients.

ICH S6 (R1)

EMA: Guideline on Immunogenicity assessment of therapeutic proteins (2017).

FDA: Points to Consider in the Manufacture and Testing of Monoclonal Antibody Products (1997).

Bo Akerstrom et al. Protein L: An Immunoglobulin Light Chain-binding Bacterial Protein[J]. Biological Chemistry. 1989. 264(33) :19740-19746.

Nilson BH et al. Purification of antibodies using protein L-binding framework structures in the light chain variable domain[J]. J. Immunol. Methods. 1993.164 (1): 33-40. 

Myhre, E. B., et al. Protein L from Peptostreptococcus magnus binds to the kappa light chain variable domain[J]. Mol. Immunol. 1985. 22(8): 879-885.

Bjorck, L. Protein L: An immunoglobulin light chain-binding bacterial protein[J]. J. Immunol. 1988. 140(4), 1194-1197.

Zhili Zheng et al. Protein L: a novel reagent for the detection of Chimeric Antigen Receptor (CAR) expression by flow cytometry[J]. Translational Medicine. 2012. 10:29.

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