一、背景介绍

1、结构

线粒体是真核细胞内的双层膜细胞器，一般呈短棒状或圆球状，直径在0.5到10微米左右（因生物种类和生理状态而异）。线粒体由外至内可划分为外膜、膜间隙、内膜和基质四个功能区。外膜比较光滑，内膜则向内褶皱形成线粒体嵴。嵴形状是判断线粒体的重要形态学指标。

2、功能

线粒体是真核生物进行氧化代谢的部位，是糖类、脂肪和氨基酸等进行三羧酸循环和氧化磷酸化的场所，产生的 ATP是生物重要的能量来源。因此，线粒体是细胞产生生物能量，进行有氧呼吸的主要场所，被称之为细胞的“能量工厂。线粒体还可以储存钙离子，可以和内质网、细胞外基质等结构协同作用，从而控制细胞中的钙离子浓度的动态平衡。

线粒体具有独立的DNA。与细胞核DNA不同，线粒体DNA属于母系遗传。与线粒体异常相关的疾病，是一大类遗传代谢病。其临床表现复杂，临床上确诊比较困难，往往需要通过大分子酶学活性检测分析并结合遗传学基因分析的双重手段确定病因。

线粒体作为生物能代谢的主要细胞器，对各种异常代谢和细胞损伤最为敏感。最常见的病理改变可以概括为线粒体氧化磷酸化异常以及线粒体数量、大小和结构的改变。此外，线粒体的损伤和衰老与保健也有着密切的关联。如果能够保持线粒体的完好无损就可以保持细胞的活力，就能够有更强的新陈代谢，也能够抵抗衰老。有关线粒体内外膜活性，电子传递链功能以及线粒体DNA、RNA和蛋白质合成等实验研究一直是生物医学研究的重要内容。而线粒体的完整性对于实验研究的可靠性有着决定性的影响。因此分离提取到较好的线粒体是实验中最为关键的一个环节。

二、实验原理

本试剂盒根据不同细胞器在沉降系数方面的差异，通过系列离心，搭配试剂盒内特定密度介质获取高度纯化、结构完整的线粒体。

实验采用较温和的方法破碎细胞，将线粒体释放出来。随后用较低的离心力离心去除大部分细胞器，上清用较高的离心力离心沉淀线粒体。得到粗提物的主要成分为线粒体，内质网等其它细胞器杂质。随后将其均匀铺设在高密度、低粘度、等渗、无毒特定介质上，离心获取目标产物线粒体。

实验示意图

三、试剂盒优点

1、纯度高：经过差速离心和密度梯度离心，在富集线粒体的同时去除了大部分细胞器的杂质，纯化倍数达5倍以上。

2、结构完整：本试剂盒破碎细胞采用高精度细胞研磨杵，密度梯度离心介质选用的为低粘度、等渗的介质，从源头确保了线粒体结构的完整性。

3、生物学活性好：提取的线粒体经特定酶活验证具有较好的生物学活性，能够进行各种线粒体活性相关的实验检测。

4、应用范围广：纯度高、结构完整、具有生物学活性的线粒体，可以进行各种线粒体相关的实验。如mtDNA相关的线粒体病的遗传学研究，线粒体形态学研究，线粒体呼吸链相关蛋白的功能性研究，特定线粒体蛋白的鉴定与提取，线粒体蛋白组学研究，线粒体蛋白相互作用的研究。

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